PCR实验室设计/苏州核酸检测实验室设计/核酸实验室规划详细介绍

标题：苏州PCR实验室设计/PCR实验室装修施工/基因扩增实验室整体设计施工/核酸检测实验室

苏州比斯克科技工程有限公司

建设依据

《医疗机构管理条例》

《医疗机构临床实验室管理办法》

《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》

《医疗机构临床基因扩增实验室管理办法》

GB 50346-2011生物安全实验室建筑技术规范

GB 50019-2003 采暖通风与空气调节设计规范

GB50243-2002通风与空调工程施工质量验收规范

GB50073-2001 洁净厂房设计规范

GB 50052-1995 供配电系统设计规范

JGJ71-1990 洁净室施工及验收规范

GB 50054-1995 低压配电设计规范

GB 50034-2004 建筑照明设计标准

GBJ 14-1987 室外排水设计规范

GB/T 3324-2008 木家具通用技术条件

PCR实验室功能区说明及注意事项;

1.试剂准备区：扩增试剂的配制、分装和保存。2. 样品处理区：样品登记、分装；核酸提取、保存和加样。3. 扩增产物分析区：扩增产物的测定、结果分析、登记及报告。4.扩增前区与扩增后区应严格分开，须使用不同的房间，两区之间有一定的间隔。5.使用商品化试剂盒可在样品处理区进行少量试剂配制。6.在满足下列操作和清洁处理要求的前提下样品处理区和试剂准备区可设在同一房间内在生物安全柜内操作。每个实验人员、实验组分别使用各自的试剂及耗材。盛放污染材料的器皿密封并一次性使用。用***方法对操作区域和共享器具在实验前后进行清洁及消毒。

 1.PCR实验室设计

①试剂准备区：仪器设备主要有冰箱、超净台、加样器、混匀器、天平和离心机等，加样器、天平除了要专用外，还应有定期校准。试剂分装应在超净台中进行，扩增反应混合液应使用分子生物学级的，试剂制备好后应有质检：一是否有污染、二是检测试剂的扩增效果。

②标本制备区：仪器设备主要有生物安全柜、加样器、离心机、温育仪、混匀器等。

③扩增区：扩增区的主要仪器是核酸扩增仪、超净台、微量加样器、离心机、可移动紫外灯。扩增仪需进行校准。并配备UPS电源，以防止由于电压的波动，停电对扩增效果的影响。

  ④分析区：本区所使用的仪器设备有酶标仪、洗板机、加样器和水浴箱等 洁净实验区的缓冲间部分面积不能超过主实验室的八分之一,这是有规定的。 

之前碰到过一些客户，说做pcr实验室总是出现假阳性，明明没有加模板***却扩出了产物。如果这种现象频频出现，就要注意一下操作环境了。如果你去百度上搜索“PCR出现假阳性了怎么办”，下面给出的建议一定会有防止交叉污染这条建议。有人说模板DNA是大分子，溶于去离子水中，怎么会无缘无故跑出来污染环境呢？苏州比斯克科技工程有限公司

PCR出现假阳性了怎么办

这里涉及一个气溶胶的概念，气溶胶是由固体或液体小质点分散并悬浮在气体介质中形成的胶体分散体系，能在空气中滞留至少几个小时。PCR反应过程中不断进行升温降温，液体蒸发又冷凝，PCR管中空气的部分形成了气溶胶，携带了大量DNA扩增产物（注意1ng扩增产物中可作为模板的DNA片段的数量超过1ng起始模板中可扩增DNA片段数量的几百万倍甚至更高。比如人的基因组DNA有30亿个bp，要扩增的单拷贝基因片段是300 bp，1ng起始模板中可以作为模板DNA片段只占总起始模板DNA总量的千万分之一）。如果在实验室打开含PCR扩增产物的管盖，大量携带DNA扩增产物的气溶胶就会涌出，扩散到空气中，从而对环境造成污染。虽然在整个空间环境中DNA的含量很低，但是由于理论上只要有1个可做为模板的DNA 片段也能PCR扩增成功，这就是为什么在污染环境中阴性对照也能扩增出条带的原因。

所以在专业的PCR实验（比如临床PCR检验实验室）室通常有四区隔离（或至少是三区隔离）的要求。

常见的三区指的是：

1、试剂配制区：PCR反应体系的配制区域。

2、标本处理区：包括扩增模板的制备，也就是我们常常提取DNA的地方；

3、PCR扩增和产物分析区：进行PCR扩增的区域，也是扩增产物进行凝胶电泳分析的区域。

此外，如果将PCR扩增区域和产物分析区再次分开，就是四区隔离了。

四区隔离，主要目的是防止气溶胶在各个PCR区域之间的流动—的方法是干脆每个区域隔一幢楼，那肯定是的隔离措施了，但操作起来肯定不现实，于是便有了针对不同区域设置正负压的方法：

试剂配制区（Ⅰ区）：最洁净的区域，保持微正压使得外界空气无法进入隔离污染源。并且阴性模板应该在此区加入PCR管并盖盖，严禁在此区域打开、存放装有DNA模板的离心管；

DNA模板添加区（Ⅱ区）：保持微负压，***内部空气不外泄，以免阳性模板的气溶胶对外界环境造成污染。

扩增及PCR产物分析区（Ⅲ区）：保持微负压，使得内部空气不外泄，以免扩增产物的气溶胶对外界环境造成污染。

操作时遵循Ⅰ区→Ⅱ区→Ⅲ区单一方向进行，不可逆向进行。

对于科研用途的PCR实验室，如果无法达到严格的三区隔离的要求，至少也要做到两区隔离：即正压区和负压区。正压区实施Ⅰ区的功能，负压区实施Ⅱ区，Ⅲ区的功能。

最忌讳也是最可怕的是反过来，在正压区实施Ⅲ区的功能。PCR实验室不同区域间的空气是互相之间否有流通是关键所在。

如果有问，我们的实验室没有正负压的区分，或者是全负压，全正压怎么办呢？那我们的建议是：别怕麻烦，找个远离Ⅲ区（通俗地讲就是打开PCR扩增产物的盖子区域，比如电泳区）的实验室当做PCR I区使用，能省掉后续更多的麻烦。

既然PCR三区隔离的目的是为了阻断气溶胶的交流，请注意以下细节，思考一下气溶胶来自哪里：

1. 每个区域都应配备专用的移液器，不可交叉混用。

2. 每个区域都应配备专用的移液器吸头，不可交叉混用。

3. 如果条件允许，在PCRⅢ区工作结束后再次进入PCR I区需要更换实验服、一次性鞋套、帽子、手套。

4. 在PCR I区、PCRⅡ区配备带滤芯吸头。

PCR实验室名词解释：PCR是聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)的简称。是一种分子生物学技术，用于放大特定的DNA片段，可看作生物体外的特殊DNA复制。通过DNA基因追踪系统，能迅速掌握患者体内的病毒含量，其***度高达纳米级别，***检测乙肝病毒在患者体内存在的数量、是否复制、是否传染、传染性有多强、是否必要服药、肝功能有否异常改变能及时判断病人适合使用哪类抗病毒***、判断******如何、给临床***提供了可靠的检验依据。

基因扩增实验又称PCR实验，其特点是能将微量的DNA大幅增加，PCR是分子生物学研究和实验的常规方法，广泛应用于生物学各个领域，例如：艾滋病检测、乙型肝炎、禽疫病、癌基因的检测和诊断，DNA指纹、个体识别、亲子鉴定及法医物证，动、植物检疫，动物及其衍生产品检测，动物饲料、化妆品、食品卫生检测，***与***微生物检测等。

一、PCR基因扩增实验室必须拥有的条件：

1、必须在无菌无尘环境下进行操作；
2、检测人员必须通过国家临检中心业务培训并取得合格证书；
3、必须通过国家临床检验中心的验收和认证；
4、检测设备必须符合标准PCR荧光实验室设置要求；
5、必须拥有标准的的PCR荧光实验室；

二、PCR基因扩增实验室建立办法流程：

1、建立样品准备区；
2、样品准备和RNA-PCR RNA-PCR的额外步骤需要额外的样品操作，这样增加了样品之间污染的机会。为了避免这一问题，反转录一步可以在样品准备区进行。在RNA-PCR中应用UNG以防止污染的方法也有报道；
3、建立前PCR区；
4、PCR实验室试剂的操作；
5、在前PCR区建立PCR混合物；
6、控制污染的方法；
7、后PCR区PCR完成以后，需要分析样品并解释数据，应该留出一个专门用于反应后处理样品的地方；

三、PCR实验室布局设计

PCR实验室原则上为试剂准备区、样品制备区、扩增区和扩增产物分析区四个单独的工作区域并设有专用走廊，各工作区域应设缓冲间，工作区与缓冲间宜安装连锁装置。不同功能的工作区应是分隔独立的，各工作区有明显的标志，不能直通，如果紧密相连，需安装物品传递窗。前两区为扩增前区，后两区为扩增后区，扩增前区与扩增后区应严格分开。实验材料、试剂、记录纸、笔、清洁材料等，只能从扩增前区流向扩增后区，即从试剂准备区→样品制备区→扩增区→扩增产物分析区，不得逆向流动。实验室的气流也应从扩增前区流向扩增后区，不得逆向流动。各工作区顶部应安装紫外灯，紫外灯的波长为254nm，每20㎡一支40W的紫外灯。

四、PCR实验室各区功能及主要设备

1、试剂准备区：主要进行试剂的制备、分装和主反应混合液的制备。试剂和用于样品制作的材料应直接运送至该区，不得经过其它区域。试剂原材料必须贮存在本区内，并在本区内制备成所需的试剂。本区主要设备有天平、冰箱、离心机、加样器、振荡器等。
对于气流压力的控制，本区并没有严格的要求。
2、样品制备区：主要进行样品的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定DNA的合成。本区主要设备有冰箱、生物安全柜、离心机、加样器、振荡器、恒温水浴等。
本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为正压，以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。
3、扩增区：主要进行DNA扩增。此外，已制备的DNA模板 (来自样品制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂准备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。本区主要设备有：扩增仪、冰箱、离心机、加样器等。
本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为负压，以避免气溶胶从本区漏出。
4、扩增产物分析区：扩增产物的测定。本区主要设备有酶标仪、洗板机、加样器和水浴箱等。
本区的压力梯度的要求为：相对于邻近区域为负压，以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。

五、PCR实验室通风柜系统及压力控制

各区域之间应具备单向的实验工艺流、物流、人流与气流，形成单向流程的保护屏障，避免实验之间的相互干扰，防止气溶胶扩散对实验过程造成污染。
PCR实验室并没有严格的净化要求，但是为避免各个实验区域交叉污染的可能性，宜采用全送全排的气流组织形式，严格控制送、排风的比例以***各实验区的压力要求。

六、PCR实验室装修装饰

实验室围护结构应牢固、气密性好；所有阴阳角宜采用圆弧过渡；墙体内壁光洁、不积尘、耐腐蚀、易清洗消毒；地面使用PVC卷材或环氧树脂自流坪，材料应满足无缝隙、无渗漏、光洁、耐腐蚀的要求。注意事项：

1、几个区域的大小设置情况，试剂准备区、扩增区、扩增产物分析区，空间可以相对小一些，样品制备区要放置生物安全柜和低温冰箱，空间应大一些。
2、试剂准备区、样品制备区设紧急洗眼器，以***操作人员的安全。
3、PCR实验室没有严格的净化要求，可以根据用户的使用情况和资金的投入选择。